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          技術(shù)文章

          一文直接教會(huì )你康寧基質(zhì)膠的使用方法

          技術(shù)文章
            康寧基底膜基質(zhì)可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細胞,厚層凝膠法允許您在三位基質(zhì)內培養細胞,薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復雜的蛋白質(zhì)層,您可以在其上培養細胞。您的選擇基于您想要實(shí)現的最終結果,無(wú)論是細胞生長(cháng)、附著(zhù)還是分化。
            薄層凝膠法
            1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
            2. 將培養板放置在冰上,以 50 µl/cm2向生長(cháng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
            3 將培養板放置在 37 °C ,30 分鐘。
            4. 如果有必要的話(huà),請在使用無(wú)血清培養基輕柔漂洗前吸出未結合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養板現在可以使用了。
            厚層凝膠法
            1.  依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
            2. 將培養板放置在冰上。向康寧基底膜基質(zhì)中加入細胞并使用預冷的移液管懸浮。以150-200 µl/cm2向生長(cháng)表面加入康寧基底膜基質(zhì)。
            3. 將培養板放置在 37°C,30 分鐘?,F在可以添加培養基了。細胞也可以培養在這一凝膠的頂部。
            薄層包被法
            1. 依照推薦的方法解凍康寧基底膜基質(zhì)。使用預冷的移液管,將康寧基底膜基質(zhì)混合至均勻。
            2. 使用無(wú)血清培養基將康寧基底膜基質(zhì)稀釋到需要的濃度。對于您的應用程序,您應該完成以經(jīng)驗為主的研究來(lái)確定您的最適包被濃度。
            3. 向被包被的容器中加入稀釋的康寧基底膜基質(zhì)。加入的量應該足以容易地覆蓋整個(gè)生長(cháng)表面。在室溫下培養 1 個(gè)小時(shí)。
            4. 吸出未結合的材料并使用無(wú)血清培養基輕柔地漂洗。培養板現在可以使用了。
            細胞復蘇:
            康寧中性蛋白酶(貨號 354235),康寧細胞復蘇溶液(貨號 354253)。使用康寧細胞復蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內解聚康寧基底膜基質(zhì)能夠實(shí)現將生長(cháng)在康寧基底膜基質(zhì)上的細胞有效地復蘇,或者使用中性蛋白酶,考慮到連續培養,中性蛋白酶作為一種金屬酶可以分散細胞。

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