細胞在適應細胞培養基的時(shí)候要注意哪些事項

　　細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營(yíng)養和促使細胞生殖增殖的基礎物質(zhì)，也是培養細胞生長(cháng)和繁殖的生存環(huán)境。無(wú)血清培養基不加動(dòng)物血清，在基礎培養基中加入細胞生長(cháng)有效因子，激素等。

　　有許多細胞系是相對容易適應無(wú)血清培養基和無(wú)蛋白培養基的，而對環(huán)境變化相對敏感的其它細胞則難以適應變化，這就需要更為專(zhuān)業(yè)的方法來(lái)讓細胞適應環(huán)境變化。

　　而根據細胞系的特性，有兩種方法可使細胞適應無(wú)血清培養基。第一種方法是連續適應/循序隔絕法；另一種方法是直接適應。

　　在適應過(guò)程中，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感。讓細胞在每個(gè)階段都至少有一個(gè)適應過(guò)渡期。

　　細胞存活率和細胞密度

　　細胞在對數生長(cháng)期中期快速分裂，且在適應過(guò)程開(kāi)始時(shí)，存活率大于90%。這一點(diǎn)至關(guān)重要。當細胞需傳代時(shí)，建議采用1:2或1:3的小傳代比例，以維持更高的細胞密度，同時(shí)提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長(cháng)因子。

　　當細胞適應新的培養條件時(shí)，在增大細胞傳代密度。

　　細胞生長(cháng)

　　如果在適應過(guò)程中，細胞停止了生長(cháng)，則需讓細胞有更多的時(shí)間來(lái)適應培養基組合。例如，在方法1的階段4，向無(wú)血清培養基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細胞更容易地適應新的培養基。

　　然后，在幾個(gè)過(guò)渡期內，緩慢地減少血清量，直至學(xué)清量為0。

　　懸浮培養物

　　一些公司的無(wú)血清培養基和無(wú)蛋白培養基不含血清中所發(fā)現的細胞貼壁因子。在一段過(guò)渡期內，貼壁細胞將開(kāi)始離開(kāi)表面，并成為懸浮細胞系開(kāi)始生長(cháng)。細胞也可能因適應而發(fā)生形態(tài)變化。監測細胞的生長(cháng)速度，只要細胞能夠與新系統相融合，任何形態(tài)變化都不重要。

　　細胞叢

　　在適應于無(wú)血清培養期間，細胞容易形成叢。傳代培養時(shí)，將叢輕輕折斷，使其分散開(kāi)。將培養物從靜止細胞培養瓶?jì)绒D移到可旋轉錐形瓶?jì)?，這樣可能會(huì )有助于防止細胞叢的形成。

　　抗生素

　　由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此，不建議在無(wú)血清適應過(guò)程中使用抗生素。如不存在血清蛋白，則抗生素水平可能會(huì )對細胞產(chǎn)生毒性。

　　預防措施

　　確保在開(kāi)始適應過(guò)程前，儲存有大量原培養基的細胞。如果細胞沒(méi)有存活到下一階段，則在整個(gè)過(guò)程中保存每一階段使用的培養瓶。